Proteína CASP8 humana recombinante (etiqueta Trx), 20 μg

La caspasa-8 (proteasa de ácido cisteína-aspártico 8/Casp8a, también denominada MCH5, FLICA y MACH alfa 1) es un miembro de 28 kDa de la familia de enzimas peptidasas C14A. Se expresa ampliamente y se considera una caspasa iniciadora de la cascada apoptótica. Actúa sobre una amplia variedad de sustratos, incluyendo las procaspasas-3, 4, 6, 7, 9 y 10, c-FLIPL y la propia procaspasa-8. La procaspasa-8a humana es una proteína de 54-56 kDa y 479 aminoácidos (aa). Contiene dos dominios de muerte N-terminales (aa 1-177), seguidos de un sitio catalítico que utiliza His317Gly318 más Cys360. Normalmente, es un monómero citosólico inactivo. Pero tras la oligomerización del receptor que contiene el dominio de muerte (DD), la caspasa-8 se recluta al complejo de señalización inductor de muerte (DISC) que se forma alrededor de los dominios de muerte del receptor oligomerizado. FADD/CAP-1 se recluta primero, seguido de procaspasa-8/CAP-4 y, posiblemente, c-FLIPL y procaspasa-10. El reclutamiento, o concentración, de procaspasa-8 induce la homodimerización. Este acto por sí solo es suficiente para la activación. Sin embargo, el nivel de actividad es modesto en el mejor de los casos, y parece estar dirigido hacia sí misma o hacia c-FLIPL, que se sabe que forma un heterodímero funcional con procaspasa-8. Cuando se dirige hacia sí misma, la autoescisión ocurre primero entre Asp374Ser375, generando un fragmento N-terminal de 43 kDa (p43) (aa 1-374) y un fragmento C-terminal de 11 kDa (aa 375-479). El extremo C-terminal se escinde posteriormente entre Asp384Leu385 para generar una subunidad p10 madura (aa 385-479). A continuación, la subunidad p43 se escinde dos veces: una entre Asp216Ser217 y otra entre Asp210Ser211 para generar un prodominio DD de 26 kDa (aa 1-210) con una subunidad p18 madura adicional de 18 kDa (aa 217-374). p18 y p10 se asocian de forma no covalente para formar un heterodímero de 28 kDa, que posteriormente se asocia con otro heterodímero p18:p10 para formar una molécula de caspasa-8 madura y activa. Esto permite que el DISC actúe sobre las procaspasas apoptóticas posteriores. Si la procaspasa-8 llega al DISC formando un complejo con c-FLIPL, c-FLIPL será escindido por la procaspasa-8, generando un fragmento p43 análogo a la subunidad p43 de la caspasa-8. Sin embargo, este fragmento no parece ser un intermediario en una cascada proteolítica. En cambio, actúa como una subunidad funcional que interactúa con TRAF2 y activa el NF kappa B. Esto podría explicar muchas de las actividades no apoptóticas asociadas con la caspasa-8. Los heterodímeros maduros de la caspasa-8a humana y murina presentan una identidad del 73 % de aminoácidos.